两种消毒剂对奶牛乳房炎致病菌的消毒效果比较

引言

奶牛乳房炎(Bouine mastitis)又名奶牛乳腺炎,是影响牛奶产量和质量的常见疾病[ 1 ] 。其发病原因主要是病原菌侵入以及外伤、挤奶技术不佳 、环境卫生 乳房缺陷和其他疾病等各种诱因导致。引发乳房炎的病原微生物比较复杂, 经达到了 100 多种[ 4 ] ，较为常见的病原有无乳链球菌、停乳链球菌、沙门氏菌、 萄球菌等，除了细菌和病毒能够导致乳房炎外，毛孢子菌、念珠菌等真菌以及加州支原体等支原 均能导致奶牛乳房炎的发生[ 6 ] 。因此,奶牛乳房炎的治疗和预防非常重要。

消毒剂作为治疗奶牛乳房炎的重要手段之一，溴铵碘[ 1 0 ] 和浓碘酊[ 1 1 ] 是两种常用的消毒剂，在医疗畜牧业等领域具有广泛的应用，它们都具有广谱杀菌作用，能有效杀灭多种致病菌。为了评价这两种消毒剂对奶牛乳房炎致病菌的消毒效果，故开展溴铵碘和浓碘酊对奶牛乳房炎致病菌杀菌及抑菌效果实验。

1 材料与方法

1 .1 试验材料

1.1.1 试验菌株

由奶牛乳房炎临床分离无乳链球菌和肺炎克雷伯菌。1.1.2 受试药物

（1）溴铵碘消毒液，江苏敖众药业有限公司生产批准文号：兽药字 101566405

（2）浓碘酊消毒液，北京立时达药业有限公司批准文号：兽药字 010051553

1.1.3 试剂和培养基

MHB 液体培养基、LB 肉汤液体培养基、LB 琼脂固体培养基、LB 琼脂培养基、BHI 肉汤培养基、BHI 琼脂培养基、PBS 缓冲液、10 g/L 的硫代硫酸钠溶液、 200g/L 的吐温80 溶液、中和剂为硫代硫酸钠和吐温80 溶液按1:1 混合溶液、96 孔聚苯乙烯微孔培养板、90 mm 一次性培养皿、10 mL 离心管、50 mL 离心管。

1.2 方法

1.2.1 药敏试验

将受试菌株接种于BHI 和 LB 液体培养基中，置于 37℃摇床培养至生长对数期，取出备用。分别对无乳链球菌和肺炎克雷氏菌进行革兰氏染色后镜检。采用药敏纸片法对2 株受试菌株进行耐药性检测，评估其临床耐药性情况。

1.2.2 MIC 测定

采用肉汤微量稀释法测定消毒剂溴铵碘和浓碘酊对无乳链球菌和肺炎克雷伯菌的 MIC[ 1 2 ] 。采用MH 培养基对消毒剂进行稀释处理，分别配制1:25、1:100、1:500 的稀释浓度。随后，取出一块 96 孔聚苯乙烯微孔培养板，以MH 液体培养基为溶剂，对原始浓度比分别为1:50、1:200、1:1000 的消毒液进行二倍稀释操作。用MH液体培养基对生长对数期的无乳链球菌和肺炎克雷伯菌菌液分别稀释至OD600nm=0.01。分别取50 μL 稀释后的两种菌液加入各孔中。此时，所使用的最终消毒剂的浓度分别为1:50、1:200、1:1000。同时，准备MH 肉汤作为阴性对照组，将无乳链球菌和肺炎克雷伯菌接种液作为阳性对照。在密封条件下，将样本置于隔水式恒温培养箱中，在37℃下恒温培养16-18 小时。培养完成后，取出样本进行观察，并设置三个平行对照组。

1.2.3 杀菌效果试验

采用LB 液体培养基和 BHI 液体培养基，将消毒剂分别稀释至 1:50、1:200、1:1000 的最终浓度。随后，准确量取4 毫升稀释后的消毒剂，分别加入至 0 毫升的离心管中。向含有消毒剂的LB 液体培养基和 BHI 液体培养基中分别接种 100μL 的肺炎克雷伯 乳链球菌菌液，在37℃的摇床中孵育一夜后，对培养基进行适宜的稀释处理。随后，取 100μL 的稀释液分别均匀涂抹于LB 平板和BHI 平板上，以此估算存活的细菌数量。同时，将两株菌种分别接种至未添加消毒剂的培养基中，在37℃的摇床中继续孵育一夜。之后，取100μL 的菌液涂抹于固体培养基平板上，作为阳性对照组。设三个平行对照。

2 结果与分析

2.1 药敏试验结果

无乳链球菌为革兰氏阳性球菌，其形态表现为单个、成双出现或短链状排列，长度各不相同。肺炎克雷伯菌为革兰氏阴性菌，无鞭毛，无芽孢，无异染颗粒。

图3 无乳链球菌镜检图

图 4 肺炎克雷伯菌镜检图

无乳链球菌对于林可霉素为低敏，其他药物为高敏，肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、林可霉素耐药，

表1 无乳链球菌和肺炎克雷伯菌药敏试验结果

注：缩写字母含义为：R 表述耐药；I 表述低敏；S 表述高敏

2.2 MIC 测定结果

经过测定，所选消毒剂溴铵碘针对肺炎克雷伯菌和无乳链球菌的最小抑菌浓度（MIC）分别为 1:1.6×10^4和 1:1.28× 10～5 ，具体数据见表 2。当溴铵碘稀释至 1:50、 1:200、1:1000 的浓度时，仍然展现出显著的抑菌作用，且抑菌率达到了 100%; ；受试消毒剂浓碘酊对肺炎克雷伯菌和无乳链球菌的MIC 值均为1：100（见表3）。浓碘酊稀释至1:50 浓度时，抑菌率才能达到 100% 。

结果表明，消毒剂溴铵碘比浓碘酊对肺炎克雷伯菌 MIC 值低100 倍，对无乳链球菌的MIC 值低1000 倍；消毒剂溴铵碘比浓碘酊对肺炎克雷伯菌和无乳链球菌的抑菌浓度低 200 倍。因此，消毒剂溴铵碘对肺炎克雷伯菌和无乳链球菌的抑菌效果优于浓碘酊。

表2 溴铵碘对无乳链球菌和肺炎克雷伯菌MIC

2.3 杀菌效果评价

在浓度分别为 1:50、1:200、1:1000 的消毒剂培养液中，分别接种了两株不同种类的细菌。将这些接种后的培养液在37℃的摇床上孵育一夜。之后 将细菌分别涂布 板上。经过溴铵碘消毒剂的处理，在所有实验组中均未观察到任何单菌落的形成。表明 的溴铵碘消毒剂对无乳链球菌和肺炎克雷伯菌均有良好的杀菌效果，杀菌率为 100% 。浓碘 50 未长出单菌落，对两株菌杀菌率皆为 100%; ；1：200 和1：1000 消毒剂有单菌落生成，杀菌率分别为：肺炎克雷伯菌为99.8%和 26.4%; ；无乳链球菌为 99.6%和 87.7% 。

结果表明，消毒剂溴铵碘比浓碘 克雷伯菌杀菌浓度均低5 倍以上。因此，在1：200 和1：1000 同等浓度条件下消毒剂溴铵碘对肺炎克雷 和无乳链球菌的杀菌效果优于浓碘酊。

表4：受试剂浓碘酊的杀菌率

3 讨论

消毒剂作为治疗奶牛乳房炎的重要手段之一，其杀菌效果及作用机理一直是研究热点。此次试验使用的消毒剂为浓碘酊和溴铵碘。浓碘酊通常所指为复方碘溶液，该溶液具备消毒及杀菌的特性。作为一种常见的外用药物，复方碘溶液在医疗领域中应用 ，主要成分为碘化钾。其作用机制是通过与蛋白质结合，干扰细菌的生长繁殖过程，从而达到抑菌的效果。但是，浓碘酊不宜用于皮肤破损处或黏膜等敏感区域，原因是该药品具有显著的刺激性和腐蚀性，并且有可能诱发过敏反应。溴铵碘是一种高效的消毒剂，具有广泛的杀菌作用。溴铵碘的作用机理涉及释放碘分子，以氧化菌体蛋白质中的活性基团，并与其氨基酸残基发生相互作用，从而抑制微生物的代谢酶系，导致病原体的崩解与死亡。此外，溴铵碘中的表面活性剂成分（如癸甲溴铵）对菌体具有显著的亲和力，能够通过吸附并溶解菌体细胞质膜，有效提升细胞膜的通透性，进而引发溶菌效应，并导致菌体内蛋白质的结构发生变性。这种双重作用机制使得溴铵碘对多种病原体具有良好的杀灭效果。此外，溴铵碘应用范围广泛，作用速度快，能够在硬水中保持 100%的灭菌效果，且不受有机物质、光线、pH 值的影响，是一种无刺激无残留且无毒无腐蚀性的环保型消毒剂。本次试验证实了溴铵碘和浓碘酊对奶牛乳房炎致病菌具有较强的杀菌效果和抑菌能力，且消毒剂溴铵碘杀菌效果总体优于浓碘酊。同时在试验过程中也验证了溴铵碘的刺激性和毒性较浓碘酊更低，对奶牛乳房组织损伤更小，因此在实际应用中更推荐将溴铵碘作为奶牛乳房炎的消毒剂使用，但在使用过程中仍需遵循正确的操作方法和使用剂量以确保其安全有效。

对于奶牛乳房炎的防治，还需要结合其他措施以达到更好的效果。例如加强饲养管理，注重场内环境卫生，饲养管理较差的奶牛场乳房炎的发病率会更高一些，当牛舍建造不合理导致牛趴卧在粪尿上时，粪尿会污染乳区，细菌会由乳腺导管进入乳腺中引发乳腺炎，同时牛舍内一般温湿度较高，适宜病原微生物生存，也会给细菌繁殖创造条件，这就需要饲养管理人员细心照料，多通风勤消毒，保证牛舍干净；规范生产操作，如若工人挤奶的过程中操作不当使乳腺受损也会诱发乳房炎；关注牛群健康状况，及时淘汰高龄奶牛，成年牛随着年龄的增长，免疫功能会逐渐降低，且随着生产年限的不断延长，乳房由于长期挤奶会产生多处机械损伤，病原微生物更易进入乳房从而造成感染。若奶牛已染病，奶牛场可以采集患病奶牛的乳样，对采集到的样品进行细菌分离培养，以明确其感染的细菌种类从而选择合适的抗菌药物和治疗方法，还可以通过药敏试验来精准用药，防止产生耐药性。

4 结论

消毒剂溴铵碘对肺炎克雷伯菌和无乳链球菌的抑菌效果优于浓碘酊。在1:200 和1:1000 同等浓度条件下消毒剂溴铵碘对肺炎克雷伯菌和无乳链球菌的杀菌效果优于浓碘酊。

参考文献

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[5] 陈瑞格,李赟辉,项维,等.鸽源 ST443 肺炎克雷伯菌的分离鉴定和生物学特性分析[J].中国兽医杂志,2024,60(05):46-55.DOI:10.20157/j.cnki.zgsyzz.2024.05.006.

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